典型病变和重要症状可作为怀疑本病的参考，确诊应进行实验室检查。(1)病原学检查①病料采集：死于炭疽的动物尸体，原则上禁止剖检。患病动物生前于濒死期采集耳静脉血液、水肿液或血便；死后可立即于四肢末梢采集静脉血液，也可切取一耳朵；必要时做腹部局部切口，采集小块脾脏，然后将切口用0.2%升汞或5%石炭酸浸透的棉花或纱布塞好，以防污染环境。②染色镜检：血液涂片或组织涂片用瑞特氏法或美蓝法染色镜检，若发现带有荚膜的单个、成双或短链的菌端平直的杆菌，链状菌体宛若竹节状，结合临床表现，可做出诊断。③分离培养、鉴定：采集新鲜血液、水肿液和组织病料，直接用于分离培养。如病料为毛发、骨粉等污染材料，70℃加热30min杀灭杂菌后再进行分离培养。病料接种于普通琼脂或鲜血琼脂平板，37℃培养，挑选可疑菌落进行荚膜及运动力测定，必要时进行串珠试验和Y噬菌体试验以对其作出鉴定。④动物接种试验：用培养物或病料悬液，皮下接种豚鼠或小鼠数只，接种动物一般于1-2d死亡，取病料染色镜检、分离培养，可作出判断。(2)免疫学试验炭疽沉淀试验(Ascoli氏反应)是诊断炭疽简便而快速的方法，但炭疽杆菌与蜡样芽孢杆菌等近缘菌有共同抗原，结果判定时须注意。此外，荧光抗体技术、琼脂扩散试验、间接血凝试验等也可用于炭疽病的诊断。牛炭疽与牛出血性败血病、牛气肿疽、羊炭疽与羊巴氏杆菌病、恶性水肿等疾病在症状、病变方面相似，应注意鉴别。
